Vol 1, Num 2, Julio-Diciembre 2021, pp 14-27
ISSN: 2796-9320
Efecto de la adición de metil -β-ciclodextrina en medios de congelación espermática para bovinos de leche
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Recibido: 20 de Marzo 2021 / Aceptado: 18 de mayo 2021 / Publicado: 01 de Julio 2021
Zootecnia
Artículo de Investigación Original
Efecto de la adición de metil -β-ciclodextrina en medios de congelación
espermática para bovinos de leche
Effect of the addition of methyl-β-cyclodextrin in sperm freezing media for
dairy cattle
Silvia Patarón Andino
1[0000-0001-7434-4162]
, Nelson Duchi Duchi
1
, Pablo Andino Nájera
1[0000-0002-0515-5330]
, Edgar
Hernández Cevallos
1
1
Escuela Superior Politécnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador
1
pataronsilvia@yahoo.com, nelduchi@yahoo.com, pablor.andino@espoch.edu.ec
Resumen. Se investigó el efecto de la adición de metil -β-ciclodextrina cargada de colesterol
en medios de congelación con el objetivo de evaluar la calidad espermática post
descongelación. Previo a la evaluación se realizó la pre dilución 1:1 dividiéndola en 3
alícuotas, para la inclusión de CLC (T0:0 mg, T1:1,5 mg, T2:3,0 mg) las cuales fueron
incubadas a 37ºC por 15 minutos, pasado este tiempo se realizó la dilución final
empajillándolas inmediatamente en pajuelas de 0,5 ml, llevándolas al congelador automático,
descendiendo la temperatura progresivamente hasta los -196ºC y almacenándolas en el tanque
de nitrógeno líquido, las pajuelas fueron descongeladas cada 7 días para su respectiva
valoración. Para el análisis estadístico se utilizó un Diseño Completamente al Azar,
obteniendo diferencias significativas P(<0,01) para la viabilidad, motilidad, vitalidad e
integridad de la membrana con medias de 56,00%; 63,50%; 75,36%; 60,08% respectivamente
pertenecientes al T1, en cuanto, a las morfoanomalias no se encontraron diferencias
estadísticas sin embargo el T2 presentó mayor porcentaje con una media de 5,40%; siendo el
mejor nivel de utilización el T1, recomendando la adición de 1,5 mg CLC en medios de
crioconservación ya que de acuerdo a los resultados obtenidos se espera obtener mejores
parámetros reproductivos.
Palabras Clave: Membrana plasmática, ciclodextrina, colesterol, parámetros reproductivos.
Abstract. The effect of the addition of cholesterol-loaded methyl -β-cyclodextrin in freezing
media was investigated in order to evaluate post-thaw sperm quality. Prior to the evaluation,
the pre-dilution was carried out 1: 1 dividing it into 3 aliquots, for the inclusion of CLC (T0:
0 mg, T1: 1.5 mg, T2: 3.0 mg) which were incubated at 37ºC for 15 minutes, after this time
the final dilution was made by immediately soaking them into 0.5 ml straws, taking them to
the automatic freezer, gradually lowering the temperature to -196ºC and storing them in the
liquid nitrogen tank, the straws were defrosted every 7 days to their respective valuation. For
the statistical analysis, a Completely Randomized Design was used, obtaining significant
differences P (<0.01) for viability, motility, vitality and integrity of the membrane with means
of 56.00%; 63.50%; 75.36%; 60.08% respectively belonging to T1, in terms of
morphoanomalies, no statistical differences were found, however T2 presented a higher
percentage with a mean of 5.40%; the best level of use being T1, recommending the addition
of 1.5 mg CLC in cryopreservation media since, according to the results obtained, better
reproductive parameters are expected to be obtained.
Keywords: Plasma membrane, cyclodextrin, cholesterol, reproductive parameters.
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INTRODUCCIÓN
Una de las técnicas de reproducción asistida más utilizadas en la actualidad y a nivel
mundial, es la inseminación artificial gracias a los bajos costos y a los enormes beneficios que
esta representa; uno de estos beneficios es obtener un mayor avance genético, razón por la cual
ha sido implementada en programas de cruzamiento y de conservación de varias especies tanto
de aquellas de interés zootécnico como de aquellas especies que se encuentran en peligro de
extinción no cabe duda, que el resultado de esta biotecnología va a depender de la calidad de
semen que se obtenga, así como el procesamiento y los métodos de crio preservación del
material biológico. (Viñán, H. 2017).
A pesar de un sin número de investigaciones y de los continuos avances en protocolos
de congelación con el desarrollo de nuevos crio protectores, las características seminales post
descongelación son inferiores a las obtenidas en el semen fresco, puesto que, durante la
dilución, crio protección, enfriamiento, congelación, almacenamiento y descongelación los
espermatozoides pueden presentar alteraciones mismas que se traducen en movimientos
irregulares, perdida de motilidad, aumento de la permeabilidad de la membrana, perdida de
componentes intracelulares, disminución del metabolismo y la producción energética afectando
la funcionalidad de la célula espermática lo que podría conducir a una reducción de la fertilidad
(Díaz, N; López, P. 2018).
Con el fin de evitar el daño espermático la ciencia ha desarrollado una amplia variedad
de diluyentes a base de azúcares como fuente energética (fructuosa, glucosa), amortiguadores
que impiden cambios de pH al formarse ácido láctico (tris, ácido cítrico), antibióticos que inhibe
la proliferación bacteriana, agentes crio protectores de la membrana (yema de huevo, leche
descremada) que protegen a la célula espermática durante el proceso de congelación.
(Vallecillo, A. 2011).
Varios estudios realizados buscan reemplazar la yema de huevo como agente crio
protector debido a las barreras sanitarias que se han impuesto a nivel internacional por los
riesgos de contaminación microbiana que este presenta, a pesar de los beneficios que tiene en
la preservación espermática; por ello existe en el mercado diluyentes a base de lecitina de soya,
mismos que, al adicionar complejos de ciclodextrina cargada de colesterol permitirá insertar
colesterol a la membrana plasmática manteniendo la funcionalidad y la estabilidad de la célula
espermática.
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MATERIALES Y MÉTODOS
Localización del área de estudio
La investigación se llevó a cabo en el Laboratorio de Reproducción Animal de la
Facultad de Ciencias Pecuarias de la ESPOCH, utilizando un solo reproductor Jersey de la
Ganadería “San Diego” ubicada en el Cantón Riobamba, Provincia de Chimborazo.
Unidades Experimentales
El número de unidades experimentales fue de 150 pajillas divididas en 3 tratamientos
y 5 repeticiones con un tamaño de unidad experimental de 10 pajillas.
Tratamiento y diseño experimental
Para la presente investigación se planteó dos tratamientos, siendo los niveles de
inclusión de ciclodextrina cargada con colesterol (T1=1,5 mg CLC y T2=3,0 mg CLC),
junto al tratamiento testigo (T0) el cual no incluye la adición de CLC; distribuyéndose bajo un
Diseño Completamente al Azar el mismo que se basa en el siguiente modelo lineal aditivo:
𝑌
𝑖𝑗
=𝜇 + 𝜏
𝑖
+ 𝜀
𝑖𝑗
Dónde:
𝑌
𝑖𝑗
= Valor de la variable dependiente
𝜇= Media general
𝜏
𝑖
= Efecto del nivel de inclusión de ciclodextrina cargada con colesterol (0; 1,5 y 3,0
mg CLC)
𝜀
𝑖𝑗
=Efecto del error Experimental
Análisis estadístico y pruebas de significancia
Los resultados numéricos de laboratorio determinados en la presente investigación,
fueron procesados usando el programa estadístico Spss (versión 2010), Excel 2008 (Microsoft
Office®) e Infostat (versión 2018), realizando los siguientes análisis estadísticos: Estadística
descriptiva, Análisis de varianza, análisis de correlación y regresión al igual que la separación
de medias usando la prueba de Waller Duncan con nivel de significancia de P <0,05 y P <0,01.
Procedimiento experimental
Colección de semen. Se usó un reproductor Jersey de 3 años, los siguientes criterios de
inclusión para el procesamiento de cada eyaculado fueron: coloración y consistencia cremosa
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libre de partículas extrañas. Las muestras de semen fueron colectadas utilizando el método de
vagina artificial con la ayuda de una hembra en estro.
Preparación de ciclodextrina cargada con colesterol. La preparación de CLC fue
realizada según lo descrito por (Purdy & Graham, 2004), en donde, se disolvió 200 mg de
colesterol en 1 ml de cloroformo. En un tubo de ensayo se diluyó 1 g de β-ciclodextrina en 2
ml de metanol. Se adicionó una alícuota de 450 µl de la solución de colesterol a la solución de
ciclodextrina y se mezcló hasta que la solución sea homogénea. La solución fue vertida en una
caja Petri de vidrio y secada a 37°C por dos días, pasado este tiempo los cristales fueron
removidos con vapores de nitrógeno y almacenados en un tubo de vidrio tapado a 22°C hasta
su uso. Una vez cargada la ciclodextrina con colesterol se preparó la solución de trabajo para
lo cual se tomó 50 mg de CLC a 1 ml de medio TALP (Tyrode’s-Albumina-Lactato Piruvato).
Tratamientos. Una vez evaluada la concentración del eyaculado se realizó una pre
dilución en relación 1:1 (semen: diluyente) misma que fue dividida en tres alícuotas numeradas
al azar según el tratamiento a realizar. T0 sin la adición de CLC/120 millones spz, el T1 tuvo
la adición de 1,5 mg de CLC/120 millones de spz/ml, y al T2 se adicionó 3,0 mg de CLC por
cada 120 millones de spz/ml, cada alícuota fue incubada por 15 minutos en baño maría a 37ºC
(Mesa & Henao, 2012). Pasado los 15 minutos se agregó el total del diluyente AndroMed,
estabilizando las muestras durante 10 minutos en temperatura ambiente, procediendo a
empajillar. (Viñán, 2017).
Empajillado y sellado. Se lo realizó de forma manual, es decir el semen fue aspirado a
través de la boca asegurándonos siempre que la absorción del semen se encuentre dentro de la
pajilla; para el sellado se puso en contacto el extremo libre o anterior de la pajilla con el Alcohol
Polivinílico, introduciéndola en agua a 5° C con la finalidad de solidificar el alcohol
polivinílico.
Congelación, descongelación y evaluación. Una vez selladas las pajuelas fueron
colocadas en la rampa de refrigeración y estabilización del congelador automático, con una
temperatura inicial de 17 °C estabilizando la temperatura de las pajillas antes del proceso de
congelación, temperatura que desciende hasta llegar a la temperatura de refrigeración 5ºC
manteniéndola por un lapso de 3 horas y 30 minutos, pasado este tiempo conocido como periodo
de estabilización las pajuelas fueron colocadas en el rack de congelación para su posterior
congelación. Para descongelar las pajillas se utilizó un termo con agua templada de (35-36ºC)
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manteniendo la pajuela sumergida durante 30-40 segundos para su posterior evaluación,
procedimiento que se llevo a cabo cada semana durante el periodo de la investigación.
RESULTADOS
En la Tabla 1 se muestran la valoración de la calidad seminal previa congelación
mediante estadística descriptiva.
Tabla 1: Valoración de la calidad seminal previa congelación
PARAMETROS
MEDIA
DESVIACIÓN ESTÁNDAR
Prob
Volumen del eyaculado (ml)
8,00
2,12
2,63
Morfología normal (%)
87,00
0,07
0,08
Motilidad individual (%)
87,00
0,04
0,06
Concentración (spz/ml)
1040x10
6
393,2x10
6
0,48
Motilidad masal (pts)
4,00
0,00
0,00
pH (pts)
6,78
0,08
0,10
EE: Error estándar
Prob: Probabilidad.
Elaborado por: Patarón, S (2021).
3.1. Volumen del eyaculado (ml)
La media obtenida para los cinco saltos fue de 8,00 ±2,12 ml siendo ligeramente superior
al reportado por (Lemma & Shemsu, 2015) con un promedio de 7,73 ml para toros Jersey,
mientras que para (Aguilar, 2016 ) quien evaluó el potencial reproductivo de toros Jersey en la
hacienda El Rosario registro una media de 5,25 ml.
Para (Rutter & Russo, 2006), el volumen tiene un rango de entre 2 y 12 ml y que, en
toros mayores de 2 años debería ser superior a 4 ml; otros factores que influyen en el volumen
es la frecuencia de la eyaculación, estado nutricional, ubicaciones geográficas, estaciones del
año, método de recolección del semen y manipulación de toros durante la extracción. (Lemma
& Shemsu, 2015).
3.2. Morfología normal (%)
El porcentaje de espermatozoides normales durante las cinco extracciones fue del 87%
± 0,07 dato que es superior al reportado por (López & Rivera, 2015), con el 80,2% mismos que
a su vez concuerdan con (Rutter & Russo, 2006), quien menciona, que un semen debe contener
mínimo un 70 % de espermatozoides con morfología normal; la disminución de la fertilidad de
un toro no siempre está dado por el porcentaje de morfoanomalías presentes en el semen, ya
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que existen alteraciones que se encuentran en el núcleo y el acrosoma de células aparentemente
normales causando anormalidades citogenéticas que disminuyen la fertilidad del toro, teniendo
que recurrir a técnicas especiales para su evaluación.
3.3. Motilidad individual (%)
Los resultados obtenidos durante la evaluación en semen fresco, mostraron ser
superiores con una media de 87 % ± 0,02 a los obtenidos por (Lemma & Shemsu, 2015) quienes
evaluaron la motilidad individual en reproductores de raza Jersey obteniendo el 79,41%,
mientras que, (López & Rivera, 2015) reportan el 95% de motilidad individual en semen fresco
de reproductores Jersey dato que es superior al encontrado en la presente investigación. La
motilidad está asociada al aumento de carnitina intracelular en los espermatozoides así como al
aumento intracelular de AMP cíclico y de proteínas-kinasas dependientes de AMP cíclico y a
la disminución de Ca++y de calmodulina. (Suárez, et al 1984, citados por Saavedra, 2018).
3.4. Concentración (spz/ml)
La concentración espermática en las cinco extracciones alcanzó una media de 1040x10
6
± 393,2 x10
6
espermatozoides/ml valores que concuerdan con otras investigaciones, sin
embargo, existen valores superiores como los hallados por (Mackinnon, 2016) con un promedio
de 1389,1 x10
6
espermatozoides/ml.
La concentración espermática puede variar dada las diferentes técnicas de conteo
espermático, como, recuentos de hemocitómetro, espectrofotómetro y sistemas de conteo
electrónico como lo indica (Veloz, 2017) en su investigación sobre los diferentes métodos para
la evaluación de la calidad espermática de reproductores bovinos donde registra una
concentración espermática de 1237,23x10
6
espermatozoides/ml en toros Jersey al evaluar con
el método CASA (Análisis seminal asistido por computadora), dato que es superior al
presentado en esta investigación.
3.5. Motilidad masal (pts)
La motilidad masal de las cinco extracciones expresadas mediante una escala de
calificación subjetiva, registro una media de 4 pts, el cual indica que la actividad cinética es
muy buena, con remolinos intensos y ondas espermáticas apreciables, valor que supera al
evaluado por (Lemma & Shemsu, 2015) con un promedio de 3,51 pts.
La motilidad masal depende de tres factores tales como, la concentración, porcentaje de
células con movimiento progresivo y velocidad de movimiento de los espermatozoides; los
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movimientos en ondas vigorosas y en remolinos rápidos se ven afectadas o eliminadas cuando
estos tres factores o uno de estos se encuentra disminuido (Veloz, 2017).
3.6. Ph
Al analizar el pH del semen durante cada una de las colectas se obtuvo una media de
6,78 ± 0,08 encontrándose dentro de los parámetros normales, el cual varía de 6,6 a 7; en caso
de que el pH sea menor puede tratarse de una oclusión en las vesículas seminales caso contrario,
cuando el potencial de hidrógeno es superior a 7 nos indica que existe la posibilidad de que
haya un proceso infeccioso. (Aguilar, G 2016).
En la Tabla 2 se muestran la valoración seminal post descongelación mediante Análisis
de varianza.
3.7. Viabilidad, %
La viabilidad espermática post descongelación presentó diferencias estadísticas
(P<0,01), así, el mayor porcentaje de viabilidad se registró en pajuelas cargadas con el T1 (1,5
mg CLC) con el 56%; seguido por el tratamiento testigo con una media de 42,60% siendo el
T2 (3,0 mg CLC) quien presentó el menor porcentaje de viabilidad espermática con un
promedio de 38% con una dispersión para cada media de 0,6037% como se muestra en la tabla
2.
Respecto a estos resultados (Purdy & Graham, 2003), obtuvieron el 55% de
espermatozoides viables con el 1,5 mg CLC en muestras incubadas a 37ºC, mientras que para
aquellas muestras incubadas a 22ºC registraron una viabilidad del 43%; en tanto que, para
muestras sin la adición de ciclodextrina a 37ºC y 22ºC alcanzaron el 18% y el 38%
respectivamente, mostrando así un efecto contario en cada uno de los tratamientos debido a que
la fluidez de las moléculas, proteínas e iones a través de la membrana plasmática es menor a
temperaturas inferiores a 37ºC. (Correa, Heersche, & Zavos, 1997).
Tabla 2: Evaluación post descongelación previa adición de ciclodextrina más colesterol en medios de
congelación
VARIABLES
NIVELES DE CLC (mg)
0
1,5
3,0
EE
Prob.
Viabilidad (%)
42,60 b
56,00 a
38,00 c
0,6037
0,001
Motilidad (%)
57,10 b
63,50 a
54,90 c
0,6893
0,001
Vitalidad (%)
54,13 b
75,36 a
52,00 b
0,9239
0,001
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Morfoanomalías (%)
5,21 a
5,01 a
5,40 a
0,2418
0,537
Integridad de la membrana (%)
46,77 c
60,08 a
55,06 b
1,2943
0,001
Letras iguales no difieren estadísticamente
EE: Error estándar
Prob: Probabilidad
Elaborado por: Patarón, S (2021)
3.8. Motilidad individual, %
Una vez realizado el proceso de descongelación los resultados mostraron diferencias
altamente significativas (P<0,01), cuyos porcentajes de motilidad individual fueron superiores
cuando se utilizó 1,5 mg CLC (T1) con una media de 63,50 %, en tanto que, para el tratamiento
testigo y para el T2 (3,0 mg CLC) se registraron promedios de 57,10 y 54,90% respectivamente
siendo la dispersión de cada media de ± 0,6893% mostrando variabilidad debido a la
sobresaturación de colesterol en la membrana, afectando la fluidez de la misma, existiendo así,
una relación inversa entre el aumento en la cantidad de CLC y la motilidad individual.
Los resultados reportados por (Purdy & Graham, 2003), establecieron porcentajes del
60, 57 y 54% correspondientes al 1,5; 3,0 y 4,5mg CLC respectivamente cuando utilizaron un
diluyente a base de huevo, mientras que, al diluir el semen en citrato de sodio obtuvieron 53 y
50% perteneciente al 1,5 y 3,0 mg CLC datos que son inferiores a los hallados en esta
investigación.
Mediante el análisis de regresión se pudo determinar que la motilidad se encuentra
relaciona significativamente (P<0,01) con la integridad de la membrana a una regresión positiva
de primer orden cuyo coeficiente de correlación es de r=0,4697 y con un coeficiente de
determinación de R
2
=0,2206 señalando que la motilidad depende en un 22,06% de la integridad
de la membrana, ver gráfico 1
El modelo de regresión obtenido es el siguiente:
MIPD = 42,683+0,293IMPD
Dónde:
MIPD: Motilidad individual post descongelación, (%).
IMPD: Integridad de la membrana post descongelación, (%).
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Gráfico 1. Tendencia de la regresión para la motilidad espermática asociada a la integridad de la membrana post
descongelación
Elaborado por: Patarón, S (2021)
3.9. Vitalidad espermática, %
En la tabla 2 se muestra como el porcentaje de vitalidad presenta diferencias
significativas (P<0,01), con medias de dispersión de ± 0,9239 % para cada uno de los
tratamientos, siendo el T1 (1,5 mg CLC) quien presentó el mayor porcentaje con 75,36%
seguido por el tratamiento testigo y el T2 (3,0 mg CLC) mismos que comparten significancia
con promedios de 54,13 y 52,00% respectivamente; resultados que superan a los hallados por
(E. Mocé & Graham, 2006), quienes encontraron porcentajes de espermatozoides vivos entre
el 52 y 25% al usar 2 mg y 4 mg de ciclodextrina cargadas de colesterol agregadas a eyaculados
de toro frescos para mejorar la crio supervivencia de los espermatozoides.
En base al análisis de regresión, se determinó que el porcentaje de espermatozoides
vivos presenta relación de dependencia al (P<0,01) con la integridad de la membrana
obteniendo un modelo de regresión lineal con un coeficiente de determinación de R² = 0,3507
y un coeficiente de correlación de r=0,5922 señalando que la vitalidad espermática depende en
un 35,07% de la integridad de la membrana como se indica en el gráfico 2 siendo el modelo de
regresión el siguiente:
VEPD = 8,6245 + 0,9611IMPD
Dónde:
VEPD: Vitalidad espermática post descongelación, (%).
IMPD: Integridad de la membrana post descongelación, (%).
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Gráfico 2. Tendencia de la regresión para la vitalidad espermática asociada a la integridad de la membrana post
descongelación
Elaborado por: Patarón, S (2021)
3.10. Morfoanomalías, %
En el análisis de varianza para el porcentaje de morfoanomalías no se registró diferencias
estadísticas entre las medias de los tratamientos (P>0,05), sin embargo, se encontraron
diferencias numéricas, donde el menor porcentaje de morfoanomalías fue para el T1 (1,5 mg
CLC) con 5,01% seguido por el 5,21% perteneciente al tratamiento control, siendo el T2 (3,0
mg CLC) quien presentó el mayor valor con 5,40% teniendo una dispersión para cada media
de ±0,2418 %.
Resultados que son superiores a los presentados por (Viñan, H 2017) quien registra el 4,54 y
4,75% de morfoanomalías al utilizar 1,5 y 2,0 mg CLC respectivamente; a su vez, estos
resultados son inferiores a los reportados por (Mejía, J 2017) quien registra un 15% de
morfoanomalias con el método de colecta de la vagina artificial.
El efecto de la adición de metil -β- ciclodextrina cargada de colesterol en medios de
crioconservación para bovinos sobre el porcentaje de morfoanomalías cuyo resultado
posiblemente se encuentre asociado al correcto funcionamiento testicular. (De Alba, 2014).
3.11. Integridad de la membrana, %
Las pajuelas que no fueron cargadas con ciclodextrina más colesterol presentan el promedio
más bajo en cuanto a la integridad de la membrana con 46,77%, mismas que difieren
estadísticamente (P<0,01) del resto de tratamientos, siendo el T1(1,5 mg CLC) quien registro
el mejor porcentaje con una media de 60,08% seguido por el T2(3,0 mg CLC) con
55,06±1,2943% respectivamente.
Resultados que, al ser comparados con (Quispe, S 2019) en su estudio al utilizar distintos
dilutores como el Tris-YH, Triladyl-YH y AndroMed reporto 51,5; 53,8 y 44,4%
respectivamente; para (Bedoya, et al, 2003) encontraron espermas que reaccionaron al test
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hipoosmotico en un 53,40% en su estudio sobre la integridad funcional de la membrana
plasmática de espermatozoides bovinos para lo cual utilizaron Tris-YH como diluyente,
resultados que son inferiores a los encontrados en la presente investigación.
La integridad de la membrana está relacionada significativamente (P<0,01) con los niveles de
adición de metil -β- ciclodextrina cargada de colesterol a una regresión de segundo orden,
siendo el coeficiente de correlación de r=0,5034 y el coeficiente de determinación de R² =
0,2534 mostrando que el porcentaje de integridad de la membrana depende en un 25,34% de
los niveles de ciclodextrina cargada de colesterol.
El modelo de regresión obtenido es el siguiente:
IMPD = -9,1585CLC
2
+ 40,778CLC + 15,159
Donde:
IMPD: Integridad de la membrana, %
CLC: Nivel de ciclodextrina cargada de colesterol en medios de crioconservación
De acuerdo al modelo de regresión obtenido se determinó que el nivel óptimo de
utilización de ciclodextrina cargada de colesterol en medios de crio preservación para obtener
un mejor porcentaje de integridad de la membrana es del 1,5 mg CLC punto donde la pendiente
del modelo comienza a ser negativa ver gráfico 3.
Gráfico 3. Integridad de la membrana post descongelación previa adición de ciclodextrina más colesterol en
medios de congelación.
CONCLUSIONES
Mediante la evaluación de parámetros reproductivos se determinó que el semen fresco
presenta una alta capacidad inicial de refrigeración y crioconservación debido a que los valores
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son aceptables tanto para el volumen, morfología normal, concentración espermática, motilidad
individual y masal.
En la evaluación seminal post descongelación se encontró que el mejor nivel de
utilización de ciclodextrina cargada con colesterol en medios de congelación fue para aquellas
pajuelas del T1 a las cuales se les añadió el 1,5mg CLC ya que presentaron los mejores
porcentajes de viabilidad, motilidad individual progresiva, vitalidad e integridad de la
membrana.
En función a los resultados alcanzados en la presente investigación se recomienda:
Establecer protocolos de congelación considerando la adición del 1,5 mg de ciclodextrina
cargada con colesterol en medios de crioconservación ya que de acuerdo a los resultados
obtenidos se espera obtener mejores parámetros reproductivos.
Dado que el colesterol puede sustituir los fosfolípidos perdidos en el proceso de
congelación es preciso continuar con estudios sobre la actividad bioquímica de la membrana.
REFERENCIAS
Aguilar, G. (2016). Determinación de la fertilidad potencial de toros reproductores bos taurus
en la Hacienda El Rosario mediante la evaluación de parámetros reproductivos
(Universidad de las Américas). Retrieved from
http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/5386
Bedoya, N., Araque, N., Rivera, M., Londoño, G., & Trujillo, L. (2003). Evaluación de la
integridad de la membrana plasmática de espermatozoides mediante test Hipoosmótico
(HOST ). Facultad Nacional de Agronomía Medellín, 56, 1983–1997. Retrieved from
https://docplayer.es/85710666-Evaluacion-de-la-integridad-funcional-de-la-membrana-
plasmatica-de-espermatozoides-bovinos-mediante-el-test-hipoosmotico-host-
resumen.html
De Alba, C. (2014). Jornada ANEMBE Problemas reproductivos de las vacas nodrizas.
Valoración de La Calidad Del Semen Bovino, 40–44. Retrieved from
http://anembeformacion.es/libro ponencias jornadas vacas nodrizas 2014.pdf
Díaz, N., & López, P. (2018). Protocolos de criopreservación de semen bovino (Universidad
Tecnológica de Pereira). Retrieved from
http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/handle/11059/9496/T636.08245
D542.pdf?sequence=1&isAllowed=y
Lemma, A., & Shemsu, T. (2015). Effect of Age and Breed on Semen Quality and Breeding
Soundness Evaluation of Pre-Service Young Bulls. Reproduction and Infertiity, 6(2), 35–
40. https://doi.org/10.5829/idosi.jri.2015.6.2.94131
López, N., & Rivera, D. (2015). Efecto de la criopreservación sobre la integridad de la
Vol 1, Num 2, Julio-Diciembre 2021, pp 14-27
ISSN: 2796-9320
Efecto de la adición de metil -β-ciclodextrina en medios de congelación espermática para bovinos de leche
https://tesla.puertomaderoeditorial.com.ar/
26
membrana plasmática en espermatozoides de toro (Zamorano). Retrieved from
https://bdigital.zamorano.edu/bitstream/11036/4596/1/CPA-2015-049.pdf
Mackinnon, M. (2016). Estudio de las variaciones estacionales de la calidad espermática en
toros de un centro comercial de procesamiento de semen (Universidad de la República).
Retrieved from https://www.colibri.udelar.edu.uy/jspui/handle/20.500.12008/19698
Mejía, J. (2017). Evaluación pre y post congelación del semen obtenido con vagina artificial y
electroeyaculador en el ganado criollo (Universidad de Cuenca). Retrieved from
http://dspace.ucuenca.edu.ec/bitstream/123456789/26940/1/Tesis.pdf
Mesa, A. ., & Henao, G. (2012). Efecto del colesterol y la dimetilformamida sobre parámetros
posdescongelación en espermatozoides de caballos criollos colombianos. Revista MVZ
Cordoba, 17(1), 2908–2915. Retrieved from
https://www.uco.es/ucopress/az/index.php/az/%0AEfecto
Mocé, E., & Graham, J. K. (2006). Cholesterol-loaded cyclodextrins added to fresh bull
ejaculates improve sperm cryosurvival. American Society of Animal Science, 84(4), 826–
833. Retrieved from
https://scholar.google.com.ec/scholar?hl=es&as_sdt=0%2C5&as_vis=1&q=Cholesterol
-
loaded+cyclodextrins+added+to+fresh+bull+ejaculates+improve+sperm+cryosurvival1
+E.+Moce´+and+J.+K.+Graham2+Department&btnG=
Mocé, Eva, Purdy, P. H., & Graham, J. K. (2010). Treating ram sperm with cholesterol-loaded
cyclodextrins improves cryosurvival. Animal Reproduction Science, 118(2–4), 236–247.
https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2009.06.013
Moncayo, S. (2016). Evaluación de la calidad seminal de reproductores bovinos antes y
después del proceso de criopreservación (Politécnica Salesiana). Retrieved from
https://dspace.ups.edu.ec/handle/123456789/11654
Purdy, P., & Graham, J. (2004). Effect of Adding Cholesterol to Bull Sperm Membranes on
Sperm Capacitation , the Acrosome Reaction , and Fertility 1. Biology of Reproduction,
71(April), 522–527. https://doi.org/10.1095/biolreprod.103.025577
Purdy, P. H., Fox, M. H., & Graham, J. K. (2005). The fluidity of Chinese hamster ovary cell
and bull sperm membranes after cholesterol addition. Cryobiology, 51(1), 102–112.
https://doi.org/10.1016/j.cryobiol.2005.05.004
Purdy, P. H., & Graham, J. K. (2003). Effect of cholesterol-loaded cyclodextrin on the
cryosurvival of bull sperm q. Cryobiology, 48, 36–45.
https://doi.org/10.1016/j.cryobiol.2003.12.001
Quispe, S. (2019). Evaluación de tres dilutores sobre características espermáticas antes y
después de la congeación de semen bovino Holstein (Universidad Nacional Micaela
Bastidas de Apurímac). Retrieved from
http://repositorio.unamba.edu.pe/handle/UNAMBA/836
Rutter, B., & Russo, A. (2006). Bases para la evaluación de la aptitud reproductiva (Segunda;
E. Capdevielle, Ed.). Retrieved from https://docplayer.es/55664957-Bases-para-la-
Vol 1, Num 2, Julio-Diciembre 2021, pp 14-27
ISSN: 2796-9320
Efecto de la adición de metil -β-ciclodextrina en medios de congelación espermática para bovinos de leche
https://tesla.puertomaderoeditorial.com.ar/
27
evaluacion-de-la-aptitud-reproductiva-del-toro-bruno-rutter-angel-russo-buenos-aires-
2006-prologo-a-la-segunda-edicion.html
Saavedra, D. (2018). Conservación seminal en toros Cebú. Efecto dela retirada del plasma y
su posterior incorporación sobre la calidad espermática en los protocolos de
criopreservación (Universidad de Zaragoza). Retrieved from
https://zaguan.unizar.es/record/69214/files/TESIS-2018-020.pdf
Vallecino, A. (2011). Departamento de genética (Unversidad de Córdoba). Retrieved from
https://dialnet.unirioja.es/servlet/tesis?codigo=56759
Veloz, D. (2017). Facultad de Ciencias Agropecuarias MAESTRIA EN REPRODUCCIÓN
ANIMAL TITULO : "Evaluación de la calidad espermática de reproductores bovinos
mediante el uso de sistemas de evaluación seminal convencional y sistema CASA (análisis
seminal asistido por computa (Universidad de Cuenca). Retrieved from
http://dspace.ucuenca.edu.ec/handle/123456789/28466
Viñán, H. (2017). Adicion De Metil Ciclodextrina Cargada De Colesterol Sobre La
Criopreservacion De Semen De Toros Holstein Friesian (Universidad Nacional Agraria
La Molina). Retrieved from
https://scholar.google.es/scholar?hl=es&as_sdt=0%2C5&q=ADICIÓN+DE+METIL-
+β-
CICLODEXTRINA+CARGADA+DE+COLESTEROL+SOBRE+LA+CRIOPRESER
VACIÓN+DE+SEMEN+DE+TOROS+HOLSTEIN+FRIESIAN%22+TESIS&btnG=
